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1、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局：


在原則上，pcr試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)：試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)、試樣制備區(qū)、放大反應(yīng)混合物配制和放大區(qū)、放大產(chǎn)物分析區(qū)。為了避免交叉污染，進(jìn)入每個(gè)工作區(qū)必須嚴(yán)格遵循出入的方向，即只從試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)→試樣制備區(qū)→放大反應(yīng)混合物配方和放大區(qū)→放大產(chǎn)物分析區(qū)。


2、個(gè)實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與壓力控制


pcr實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但為了避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)之間交叉污染的可能性，建議采用全氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制空氣的輸送和排放比例，保證各試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。


2.1pcr試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)


實(shí)驗(yàn)區(qū)的主要操作是制備貯存試劑、分離試劑和制備主要反應(yīng)混合物。用于樣品生產(chǎn)的試劑和材料必須直接運(yùn)到該地區(qū)，不得通過(guò)其他地區(qū)。試劑的原料必須存放在該區(qū)域，所需的存儲(chǔ)試劑必須在該區(qū)域制備。


這一地區(qū)對(duì)氣流壓力的控制沒(méi)有嚴(yán)格的要求。


2.2pcr試樣準(zhǔn)備區(qū)


該區(qū)域主要用于樣品的保存、核酸(rna，dna)的提取和儲(chǔ)存、擴(kuò)增反應(yīng)管的加入以及dna的合成。


該區(qū)域的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域的正壓力，以避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入該區(qū)域的氣溶膠污染。此外，由于在取樣過(guò)程中可能發(fā)生氣溶膠污染，應(yīng)避免不必要的氣體在該區(qū)域周圍行走。


2.3放大混合物配方和增強(qiáng)區(qū)


該區(qū)域主要是作為dna放大操作。此外，在這一地區(qū)還可以添加準(zhǔn)備好的dna模板(來(lái)自樣品制備區(qū))和將主要反應(yīng)混合物(來(lái)自試劑儲(chǔ)存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合物。


該區(qū)域的壓力梯度要求是相對(duì)于鄰近區(qū)域的負(fù)壓，以防止氣溶膠泄漏出該區(qū)域。為了避免氣溶膠污染，應(yīng)盡量減少該地區(qū)不必要的移動(dòng)。個(gè)別操作，如取樣，應(yīng)在超清晰表中進(jìn)行。


2.4放大產(chǎn)品分析領(lǐng)域


該區(qū)域主要用于測(cè)定放大后的碎片。


這個(gè)地區(qū)是添加劑污染的主要來(lái)源。因此，這一區(qū)域的壓力梯度必須是相對(duì)于鄰近區(qū)域的負(fù)壓，以防止放大產(chǎn)物從這一區(qū)域擴(kuò)散到其他區(qū)域。


PCR擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。


2實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制


PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)。


2、壓力要求。


2.1PCR試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)


該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。


對(duì)與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。


2.2PCR標(biāo)本制備區(qū)


該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。


本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。


2.3擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)


該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。


本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。


2.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)


該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。


本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。


3、預(yù)防和控制污染


pcr實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的中心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)踐中，常見(jiàn)的污染類型有：放大產(chǎn)物的污染天然基因組dna的污染試劑的污染和標(biāo)本之間的污染。一旦污染發(fā)生，實(shí)驗(yàn)必須停止，直到找到污染源，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須失效，實(shí)驗(yàn)必須重新進(jìn)行。因此，在污染發(fā)生后在實(shí)驗(yàn)室周圍尋找污染源不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且浪費(fèi)人力物力。因此，為了避免污染，預(yù)防應(yīng)該是第一步，而不是消除。


3.1嚴(yán)格劃分工作領(lǐng)域


(一)各試驗(yàn)區(qū)設(shè)置合理


(2)每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)必須有明顯的標(biāo)記(如醒目的房標(biāo)或不同的地色等)，以避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的設(shè)備項(xiàng)目和試劑混淆。


3.2合理的系統(tǒng)設(shè)置


(一)合理設(shè)置空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)，盡量采用全交付式空調(diào)系統(tǒng)


(2)嚴(yán)格的氣流壓力控制，以確保不同試驗(yàn)區(qū)的不同壓力要求。


3.3規(guī)范的操作


(一)擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須接受誘導(dǎo)培訓(xùn)，并通過(guò)培訓(xùn)，方可進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)


(2)在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作人員必須戴上手套并經(jīng)常更換。另外，操作中使用一次性帽也是防止污染的有效措施


(三)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，該地區(qū)必須立即清理。除常規(guī)消毒液擦拭表面或紫外線燈照射消毒外，部分實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。


3.4嚴(yán)格管理


(一)嚴(yán)格控制人員進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的人不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。在條件允許的情況下，必須設(shè)置獨(dú)立的通道和門(mén)，進(jìn)出整個(gè)試驗(yàn)區(qū)


(2)盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)不必要的移動(dòng)的可能性，以減少交叉污染。


(三)放大產(chǎn)物分析區(qū)是放大產(chǎn)物的主要污染源。廢液不能傾倒在實(shí)驗(yàn)室，必須用消毒劑消毒，放在指定的位置處理。用過(guò)的吸頭和其他一次性材料，也應(yīng)在浸泡后統(tǒng)一消毒焚化處理


(四)放大產(chǎn)品分析領(lǐng)域可以使用某些誘變和有毒物質(zhì)。應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)室人員的安全保護(hù)。


3.5適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室設(shè)施


完整的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件。設(shè)備和儀器應(yīng)根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容配備，如超清潔工作臺(tái)、離心機(jī)和采樣器。


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