1. 測定原理
氯丙嗪檢測試劑盒是利用免疫學(xué)直接競爭法的原理,固相載體微孔板上包被有氯丙嗪蛋白偶聯(lián)物,加入待測氯丙嗪標準品或樣品溶液及氯丙嗪的抗體,包被在微孔板上的氯丙嗪蛋白偶聯(lián)物和標準品或樣品中的氯丙嗪競爭性地與抗體結(jié)合,形成抗原抗體復(fù)合物;洗滌后再加入二抗,洗滌后加入顯色劑,將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍色的產(chǎn)物;加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色;在450nm波長進行檢測,樣品中的氯丙嗪濃度與吸收光強度成反比。
2. 試劑盒組成
(1)96孔酶標板: 1塊 96 T/8孔
(2)標準品: 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1ppb(1mL/瓶)
(3)抗體工作液: 1瓶(7mL)
(3) 酶標記物: 1瓶(12mL)
(4)底物緩沖液: 1瓶(7mL)
(5)底物液: 1瓶(7mL)
(6)終止液: 1瓶(7mL)
(7)20倍濃縮洗滌液: 1瓶(50mL), 加蒸餾水稀釋到1000 mL
(8)復(fù)溶液(濃縮): 1瓶(15ml),加蒸餾水稀釋至300ml
(9)使用說明書 1 份
(10)封板膜: 2張
(11)封口袋: 1 個
3. 注意事項
(1)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
(2)不要使用過了有效日期的氯丙嗪檢測試劑盒,不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用,以免降低靈敏度。
(3)0標準品的A450nm<0.6時,表示試劑可能變質(zhì),請勿使用。
(4)顯色劑變藍,表明已變質(zhì),請勿使用。
4. 儲存條件
(1) 2-8℃保存,切勿冷凍。
(2)將不用的酶標板放進帶干燥劑的封口袋中密封保存。
(3) 酶標記物和顯色液對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
5. 樣品處理
(1) 尿樣
取新鮮干凈的尿樣50 μL進行分析。
(2)組織、肌肉樣品 (稀釋倍數(shù)為1)
a.取1g±0.05 g組織,加入6 mL乙腈,振蕩10 min,室溫4000 r/min以上離心10 min;
b.取全部上清置于離心管中;在殘渣中再加入4ml乙腈,振蕩10 min,室溫4000 r/min以上離心10min。
c.混合兩次上清液,振蕩1min,于50 ℃下氮氣或室溫下吹風(fēng)機吹干;
d.加入1 mL配好的復(fù)溶液,取50 μL進行分析。
6. 免疫分析時試劑的準備
(1) 注意事項
a) 使用之前將所有試劑回升至室溫。
b) 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
c) 在使用中不要讓微孔干燥。
d) 在EIA分析中的重復(fù)性,很大程度上取決于洗板的一致性,仔細按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
e) 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
(2) 濃縮洗滌液使用前應(yīng)根據(jù)所需量進行20倍稀釋,即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進行稀釋。
(3) 復(fù)溶液為濃縮溶液,使用前應(yīng)根據(jù)需要量進行20倍稀釋,即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進行稀釋。
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