廣州輝駿生物科技股份有限公司

一、腺病毒服務(wù)簡(jiǎn)介腺病毒(adenovirus)是一種無(wú)包膜的線狀雙鏈DNA病毒。它的宿主范圍很廣，既可感染分裂細(xì)胞，又可感染非分裂細(xì)胞。腺病毒在感染宿主細(xì)胞時(shí)，病毒基因組及其攜帶的外源基因獨(dú)立于宿主基因組外游離表達(dá)，因此無(wú)插入突變性，安全性更高。腺病毒載體的外源基因裝載量較大、表達(dá)速度快，產(chǎn)生的病毒滴度高，因此已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和基因治療中。輝駿生物使用的腺病毒包裝系統(tǒng)包括一個(gè)穿梭質(zhì)粒和一個(gè)輔助質(zhì)粒，攜帶外源基因的穿梭質(zhì)粒與含有腺病毒基因組(E1/E3缺失)的輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后，利用Cre-loxP重組酶切割系統(tǒng)，即可產(chǎn)生攜帶外源基因的非復(fù)制型重組腺病毒，重組效率大大提高。包裝出的腺病毒液可直接感染宿主細(xì)胞，介導(dǎo)外源基因的瞬時(shí)、高效表達(dá)。輝駿生物的腺病毒載體包含多種熒光標(biāo)簽(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標(biāo)簽和多種啟動(dòng)子，可充分滿(mǎn)足客戶(hù)不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求。 二、腺病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)1>病毒基因不整合到染色體中，而是游離于宿主細(xì)胞染色體外瞬時(shí)表達(dá)，無(wú)插入致突變性；2>有廣泛的宿主范圍，對(duì)分裂期和非分裂期細(xì)胞均有感染作用；3>不需要轉(zhuǎn)染試劑，操作簡(jiǎn)便，轉(zhuǎn)染效率極高；4>外源基因裝載容量大，可插入高達(dá)8kb的外源基因片段；5>能同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因，可以將含有兩個(gè)基因的雙表達(dá)盒插入腺病毒轉(zhuǎn)移載體中，或者用不同的重組病毒共轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞株來(lái)分別表達(dá)一個(gè)蛋白；6>病毒感染后，外源蛋白表達(dá)快，實(shí)驗(yàn)周期短。 三、腺病毒技術(shù)整體流程A.腺病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)客戶(hù)的不同需要，將目的基因片段連接至腺病毒穿梭載體；B.腺病毒包裝：腺病毒穿梭質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝；收集富含腺病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后進(jìn)行滴度測(cè)試，得到滴度≥1×10⁸ e8pfu/ml的腺病毒液；                                                                圖1腺病毒技術(shù)服務(wù)整體流程四、腺病毒穿梭載體元件       在腺病毒的包裝系統(tǒng)中，腺病毒基因組質(zhì)粒負(fù)責(zé)攜帶腺病毒的大部分骨架元件，穿梭質(zhì)粒負(fù)責(zé)攜帶外源基因表達(dá)盒。兩者共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后發(fā)生同源重組，攜帶外源基因的病毒基因組被包裝，產(chǎn)生重組的腺病毒顆粒。輝駿生物提供的穿梭質(zhì)?？梢圆迦攵喾N不同的外源基因表達(dá)盒，具體元件如下所示，除此之外，客戶(hù)還可以根據(jù)需要更換啟動(dòng)子、熒光基因或抗性基因。                                                                                          圖2腺病毒載體元件示意圖 五、腺病毒技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目表1 腺病毒服務(wù)項(xiàng)目及內(nèi)容分類(lèi)服務(wù)編號(hào)項(xiàng)目名稱(chēng)客戶(hù)提供服務(wù)描述基因過(guò)表達(dá)腺病毒服務(wù)FG201基因過(guò)表達(dá)腺病毒載體構(gòu)建目標(biāo)基因的模板構(gòu)建載體FG202基因過(guò)表達(dá)腺病毒包裝套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝microRNA腺病毒服務(wù)FG211microRNA過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建microRNA前體或初始產(chǎn)物模板構(gòu)建載體FG212microRNA過(guò)表達(dá)腺病毒包裝套餐microRNA前體或初始產(chǎn)物模板(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝RNAi腺病毒服務(wù)FG221RNAi腺病毒載體構(gòu)建目標(biāo)基因登錄號(hào)或序列(1)設(shè)計(jì)并合成1條干擾序列(2)構(gòu)建載體FG222RNAi腺病毒包裝套餐A目標(biāo)基因登錄號(hào)或序列(1)設(shè)計(jì)并合成3條干擾序列(保證至少有1個(gè)靶序列的干擾效率大于70%)(2)分別構(gòu)建3條載體(3)分別進(jìn)行3次腺病毒包裝FG223RNAi腺病毒包裝套餐B設(shè)計(jì)好的有效靶點(diǎn)序列(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝注: 可提供多條干擾序列特別提醒：（1）基因過(guò)表達(dá)腺病毒服務(wù)適用于目標(biāo)基因長(zhǎng)度為4000bp以下的片段，4000bp以上的請(qǐng)具體咨詢(xún)；（2）我公司亦可進(jìn)行基因釣取和WB檢測(cè)服務(wù)，但費(fèi)用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實(shí)際情況收費(fèi)；（3）客戶(hù)如對(duì)所需病毒量及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×10¹¹~1×10¹³ vp之間，規(guī)格為1mL；（4）若實(shí)驗(yàn)材料為原代細(xì)胞和需要特殊培養(yǎng)的細(xì)胞，請(qǐng)具體咨詢(xún)；（5）客戶(hù)亦可根據(jù)特殊要求進(jìn)行腺病毒產(chǎn)品定制服務(wù)。 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果提交實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，我公司會(huì)提交完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括：1.客戶(hù)定制的相應(yīng)載體或病毒液；2.腺病毒液滴度測(cè)定報(bào)告單；3.腺病毒載體的測(cè)序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；4.全部實(shí)驗(yàn)圖片；5.詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。 七、實(shí)驗(yàn)周期及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：咨詢(xún)本公司