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TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”，兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理類(lèi)似。不同的是TAP/MS引入了2個(gè)純化標(biāo)簽（strep或SBP，flag），2步純化，能有效純化裂解液中的靶蛋白及其復(fù)合物，并使非特異性蛋白的數(shù)量降至較低水平。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組洗脫的蛋白分別做質(zhì)譜，從實(shí)驗(yàn)組結(jié)果中扣除對(duì)照組中的蛋白，即可鑒定出與靶蛋白互作的蛋白。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)：
1、TAP/MS鑒定到的互作蛋白是細(xì)胞內(nèi)與誘餌蛋白天然互作的，符合體內(nèi)真實(shí)生理情況，可信度高。
2、采用兩步純化，能有效減少非特異蛋白的結(jié)合。
服務(wù)內(nèi)容:
1、構(gòu)建Flag-strep（或Flag-SBP）雙標(biāo)簽的靶基因表達(dá)載體；
2、包裝慢病毒感染目的細(xì)胞，做成過(guò)表達(dá)細(xì)胞株，WB檢測(cè)表達(dá)效果（基因大于2kb時(shí)，可能導(dǎo)致病毒滴度不足以感染細(xì)胞系，此時(shí)如需進(jìn)行加藥篩選構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，則周期預(yù)計(jì)延長(zhǎng)3-4周）；
3、細(xì)胞總蛋白，經(jīng)streptactin樹(shù)脂（或strep磁珠）和anti-flag抗體兩步純化，并洗脫；
4、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的洗脫液分別用胰酶酶解；
5、LC-MS/MS分析，獲得蛋白質(zhì)的定量、定性信息；
6、實(shí)驗(yàn)組結(jié)果扣除對(duì)照組中的蛋白，即可得到與靶蛋白互作的蛋白。
服務(wù)項(xiàng)目客戶(hù)提供結(jié)果交付實(shí)驗(yàn)周期TAP/MS1、誘餌基因的名稱(chēng)、序列、物種等信息或者誘餌基因的cDNA模板等
2、待研究的細(xì)胞（保證細(xì)胞狀態(tài)良好）及其培養(yǎng)相關(guān)信息1、構(gòu)建好的慢病毒表達(dá)載體
2、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系(如做了篩選)
3、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組蛋白的質(zhì)譜鑒定結(jié)果
4、數(shù)據(jù)分析結(jié)果預(yù)計(jì)2.5-3個(gè)月
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