一、服務(wù)簡介
    shRNAs(RNA-ShorthairpinRNAs):即短發(fā)夾RNA,是能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子??寺〉捷d體中的shRNA包括兩個短的反向重復序列,中間由一莖環(huán)(loop)序列分隔,組成發(fā)夾結(jié)構(gòu),由polⅢ啟動子(如人/鼠源的U6啟動子和人H1啟動子)控制,隨后連上5-6個T作為polⅢ的轉(zhuǎn)錄終止子。
我們可以根據(jù)靶基因設(shè)計shRNA,并合成2條互補的、編碼shRNA的DNA單鏈,退火后連接到慢病毒載體的polⅢ 啟動子下游。shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染細胞后,經(jīng)由細胞內(nèi)的RNAi通路處理形成siRNA而最終發(fā)揮干擾作用。
二、技術(shù)優(yōu)勢
    1、 用途廣泛,既可被包裝產(chǎn)生shRNA慢病毒,又能以質(zhì)粒形式轉(zhuǎn)染細胞;
    2、 與化學合成的siRNA相比,shRNA以質(zhì)?;虿《拘问竭M入細胞,不易降解,更穩(wěn)定;
    3、 載體多樣,篩選標簽種類豐富。
三、服務(wù)內(nèi)容
    1、  設(shè)計shRNA序列:根據(jù)目的mRNA序列設(shè)計3條shRNA序列;
    2、  模板合成:合成每條編碼shRNA的單鏈DNA模板,退火形成DNA雙鏈。模板鏈后面連接RNAPolyIII聚合酶轉(zhuǎn)錄終止位點,且兩端分別設(shè)計酶切位點;
    3、  DNA雙鏈和慢病毒載體的連接;
    4、  連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
    5、  測序驗證。
四、服務(wù)須知
服務(wù)項目客戶提供交付產(chǎn)物實驗周期shRNA慢病毒載體構(gòu)建1、靶基因的序列或設(shè)計好的shRNA序列
2、指定載體1、shRNA慢病毒載體
2、載體圖譜、測序結(jié)果2-3周
五、具體實驗周期及費用:請咨詢我司客服人員
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